Микроскопия нативного мазка, окраска по Граму

Общая информация

Метод Грама представляет собой метод окрашивания микроорганизмов для исследования, что позволяет дифференцировать бактерии по биохимическим свойствам их клеточной стенке. Данное исследование было разработано в 1884 году датским врачом Гансом Кристианом Грамом.

Для окрашивания мазка по Граму применяется анилиновый краситель — генциановый или метиловый фиолетовый и другие, после чего краситель фиксируют раствором йода. При промывании окрашенного препарата спиртом виды бактерий, которые оказались прочно окрашенными в синий цвет, называют грамположительными бактериями, они обозначаются Грам (+), — в отличие от грамотрицательных, Грам (−), которые при промывке обесцвечиваются.

После промывания растворителем при окрашивании по Граму добавляется контрастный красный краситель, окрашивающий все грамотрицательные бактерии в красный либо розовый цвет. Данная особенность основана на наличии у бактерии внешней мембраны, которая не позволяет проникнуть красителю внутрь клетки. Анализ применяется для классификации бактерий, разделяя их на две группы, основываясь на строении их клеточной стенки.

Окраска по Граму имеет важное значение в систематике бактерий, а также для микробиологической диагностики инфекционных заболеваний.

Кокковые и спороносные формы бактерий, а также дрожжи — грамположительны и при окрашивании приобретают иссиня-черный или темно-синий цвет, многие неспороносные бактерии — грамотрицательны и окрашиваются в красный цвет, при этом ядра клеток приобретают ярко-красный цвет, а цитоплазма — розовый.

Окраска по Граму – это достаточно сложный способ окраски, так как в этом случае на мазок воздействуют двумя красителями, один из которых является основным, а другой — дополнительным. Помимо красящих веществ при сложных способах окраски используются обесцвечивающие вещества, например, спирт или кислоты.

При проведении окраски по Граму преимущественно применяются красители трифенилметановой группы, такие как генциановый, метиловый фиолетовый или кристаллический фиолетовый. Грамположительные Грам (+) микроорганизмы формируют прочное соединение с перечисленными выше красителями и йодом. При этом они не обесцвечиваются при воздействии на них спиртом, в результате чего при дополнительной окраске фуксином Грам (+) микроорганизмы не изменяют первоначально принятый фиолетовый цвет.

Грамотрицательные Грам (-) микроорганизмы формируют с основными красителями и йодом легко разрушающееся под воздействием спирта соединение, вследствие этого происходит обесцвечивание микробов, благодаря чему они окрашиваются фуксином, приобретая красный цвет.

Показания

Данное исследование назначается:

при заболеваниях мочеполовых органов, например, цистите, уретрите, пиелонефрите, простатите для обнаружения их возбудителя;

при заболеваниях ЛОР-органов, например, отите, синусите, рините, ангине, тонзиллите;

при заболеваниях бронхолегочной системы, таких как трахеит, бронхит, плеврит, воспалительное поражение легких;

при заболеваниях пищеварительного тракта инфекционного генеза, гастритах, энтеритах, а также острых кишечных инфекциях.

Полученные результаты

Метод Грама позволяет дифференцировать бактерии по биохимическим свойствам их клеточной стенки.

Окраска по Граму имеет важное значение в систематике бактерий, не менее важной она является для микробиологической диагностики инфекционных заболеваний.

Грамположительны кокковые (кроме представителей рода Neisseria) и спороносные (за исключением Coxiella burnetii) формы бактерий окрашиваются в иссиня-черный либо темно-синий цвет.

Грамотрицательные многие неспороносные бактерии окрашиваются в красный или розовый цвет.

Предполагаемые болезни

Результаты микроскопии дают возможность ориентировочно судить о характере микрофлоры, ее количественном содержании и соотношении различных видов микроорганизмов в биологическом материале, что также позволяет получить предварительную информацию об обнаружении этиологически значимого инфекционного агента в данном биоматериале, что позволяет специалисту быстро назначить корректное лечение (эмпирическое). Микроскопическое исследование мазка (бактериоскопия), окрашенного по Граму, применяют при исследовании мокроты, гноя, отделяемого из ран, слизистых оболочек, например, мазка из цервикального канала, зева, носа, глаза, уретры, ротоглотки.

Врач-консультант

Данное исследование может быть назначено врачом общей практики, оториноларингологом, инфекционистом, хирургом, терапевтом, педиатром.